广博世纪

尊敬的PCR实验室的老师们：
您好！
当您运用PCR（基因扩增）技术进行DNA检测时，经常会受到假阳性信号的困扰。现在，我们给您推荐一种革命性的DNA检测技术——四维核酸分子杂交技术，它能有效解决假阳性信号的干扰，起到很好的质量控制作用。
四维核酸分子杂交技术就让DNA寡核苷酸片段在特定反应试剂——既四维杂交试剂的环境下，用四个参数（即DNA片段长度；碱基组成，如GC含量；碱基的排列；和反应的温度扫描）来确定杂交反应的特异性。它能有效排除传统三维杂交反应（不重点考虑温度因素）中错配一、二个碱基的样本核酸链产生的假阳性信号，大大提高再重复性。这里的再重复性不仅包含结果的再重复性，也包含单管样本检测过程的再重复性。

具体应用例子如下：
1、 运用于TaqMan荧光定量PCR测量结果分析，排除假阳性信号。在北京某医院PCR实验室，其HBV的PCR检测结果中，阴性对照的扩增曲线经常出现阳性尾巴（弱阳信号），为了能够定标，实验室的老师不得不做双份阴性对照，其中一份阴性对照的扩增曲线是符合质控要求的，所以要用符合质控要求的阴性对照来定标，但是，不知道实验室是否存在环境污染？我们看了TaqMan荧光定量PCR的HBV结果后，建议其将扩增后的反应管放入4°C冰箱存放10分钟，然后离心2分钟，再打开盖子，加入四维杂交试剂。按照编排的程序作熔点曲线扫描，得到各个管的熔点峰曲线。通过对比熔点峰发现，两个阴性对照熔点峰值是在同一个位置（距离<1°C），与阳性质控的熔点峰值之间的距离大于2°C以上。说明阴性对照的扩增曲线出现阳性尾巴（弱阳信号）是非特异的系统假阳性信号，并不是操作或环境污染带来的假阳性结果，所以就不必花大力气去清洗环境。为了应对人们对于开盖可能造成外来污染的质疑，我们新推出了预先将四维杂交试剂放入盖子内，经过冷冻干燥后可以室温存放；做PCR实验时，给反应管盖上此种盖子，先做PCR扩增；做完PCR的结果后，通过倒置离心溶解试剂，再正向离心反应液复位，然后做熔点曲线扫描，这样就不用开盖子加四维杂交试剂了。存于盖子内的四维杂交冻干试剂不会影响反应管内的PCR反应分析，这是经过反复实验检验过的。另外，加入四维杂交试剂后的PCR反应管，可以再三重复熔点曲线扫描过程，只要反应管保存于4°C冰箱，结果也可以反复重复给PCR试剂厂家的人员观看，这样做可以通过提供经得起推敲的确凿证据而有助于解决可能存在的问题和纠纷。罗氏公司的COBAS Amplicor仪器（PCR仪的一种）始终是用一根金属针刺穿PCR扩增后产物管盖取样、加试剂，做完6000次检测后才会换针，如此操作并没有发生污染事故。而我们的PCR实验室老师们用的都是一次性塑料加样器吸头，就那么容易发生污染事故？！现在我们可以用确凿的证据来说话了。
2、 运用于检测荧光PCR仪热循环效果的均匀性。我们公司买了一台德国eppendorf公司制造的realplex实时荧光定量PCR仪，这台机器采用的是96孔金属块作为热循环介质。一般做过PCR仪销售的人们都会质疑金属块热循环效果的几何不均匀性，但是，谁都拿不出确凿的经得起推敲的证据来证明此点，因为PCR的试剂决定了单管PCR过程是一次性不可逆的过程，也就是说单管PCR过程不可再重复，所以谁都不敢怀疑PCR仪器系统可能存在问题。我们采用自己发明的专利四维杂交试剂，用人工合成的16个碱基DNA片段以及互补的16个碱基DNA片段，按一样的标准比例浓度放入8排管的每一个管中，由于是人工合成的高纯度寡核苷酸，即不需要提取核酸步骤（无损失率造成测量误差），也不需要扩增（不会引起核酸序列失真），盖好盖后，将每个管单独分离开来；4个管放入金属块的A行，另外4个管放入金属块的H行对称位置；经过熔点曲线扫描，得到的结果是A行平均熔点值（Tm）比H行的平均值偏高接近1°C；然后我们对称的互换A行与H行的反应管位置，再做熔点曲线扫描，得到的结果也是A行平均熔点值（Tm）比H行的平均值偏高接近1°C；再对称的互换A行与H行的反应管位置，再重复做熔点曲线扫描，得到的结果再一次是A行平均熔点值（Tm）比H行的平均值偏高接近1°C；…。再三重复检测过程，得到的结果都是A行平均熔点值（Tm）比H行的平均值偏高接近1°C，从未出现过H行平均熔点值（Tm）比A行的平均值高的情况，即存在边缘效应。而且这个检测重复过程是当作德国eppendorf公司技术专家的面完成的，德国eppendorf公司出厂说明书标明的随机误差小于0.5°C，尽管厂家在广告中声称其金属块热循环已克服了几何形状不均匀性（无边缘效应），在再三重复的证据面前，厂家的技术专家也不得不承认PCR仪金属块热循环存在系统缺陷（有边缘效应）。有的老师可能会问：金属块熔点温度的不均匀性会对PCR结果有何影响？！金属块熔点温度的不均匀性会造成PCR反应过程中引物与样本核酸链杂交效率不均匀，从而造成PCR的扩增效率不均匀，由于PCR是按指数倍放大，很小的不均匀性误差经过放大就可能造成质的变化，即有可能同样成份的二份弱阳标本，同时扩增，出来的结果可能是一阴一阳。为何会出现这种事情？难道德国造的仪器不够精确？！不是的，这是因为此前从未有过分子生物学的试剂可以让受检样品的单管检测过程进行再三重复，也就无法发现仪器存在的系统缺陷和对仪器系统进行校正，此前如果PCR实验检测结果出现失误，厂家都会归因于操作、耗材或试剂存在问题，从未考虑到PCR仪器可能存在系统缺陷问题。所以，四维杂交试剂优异的再重复性，可以给PCR仪器提供方便简捷的质量控制。
创新的四维核酸杂交技术，克服了生命科学中普遍存在的再重复性差的弱点，既可以为试剂系统做质量控制，也可以为仪器系统做质量控制和提供校正依据。其独到特点为临床DNA检测提供了坚实可靠的基础，是DNA检测技术的一次革命。

目前，本公司提供二种包装类型四维杂交试剂，一种是液体试剂，每个包装是100个反应检测，一个包装售价300元人民币；另一种是冻干试剂，预置于PCR反应管(8排平)盖子内，每个包装96个反应检测，一个包装售价384元。所有试剂都可室温运输，存储在2~8°C冰箱内，都需要避光。
货  号 名  称 包  装 运输/存储 价格（人民币）
001 四维杂交试剂I 100 避光，室温/2~8°C 300.00
002 四维杂交试剂II 96 避光，室温/2~8°C 384.00
003 边缘效应质控 8 避光，室温/2~8°C 1000.00
欢迎广大的PCR实验室的老师们使用本公司的产品和技术，我们将皆尽所能为您服务。


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