四维杂交试剂的阳性质控品
本质控品由化学合成的短DNA片段(<20bp)构成,其浓度在20uM以上。用四维杂交试剂4DHG可以直接检测,不需要进行扩增。包装盒提供二管阳性质控P1和P2(浓度均>20uM),一管反应缓冲液B(20x),一管无核酸酶的双蒸水H2O。
阳性质控P1和P2反应管反应液配制:
P1: H2O 16uL
B(20x) 1uL
4DHG(20x) 1uL
P1 2uL
总体积 20uL
P2: H2O 16uL
B(20x) 1uL
4DHG(20x) 1uL
P2 2uL
总体积 20uL
将P1和P2管同时放入实时荧光PCR系统(例如LightCycler PCR仪或realplex PCR仪),进行熔解曲线扫描,对LightCycler,其程序可为:
95℃保持2分钟,40℃保持6分钟,以0.01℃/秒升温速度扫描至95℃,收集数据采用“cont”,然后降温至40℃,保持半分钟,结束。
如果得到的P1及P2熔点峰值Tm1和Tm2重叠在一起,即偏差不超过1℃,证明四维杂交试剂和阳性质控品都是有效的。如果偏差超过1℃,说明四维杂交试剂体系失效。
保存:避光,2-8℃。效期:2-8℃为6个月;-20℃为1年。
包装:5次反应。
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四维杂交技术阳性质控品使用说明书
